حیاتیاتی خصوصیات اور فائیٹوپیتھوجینک فنگس Ilyonectria کریسا کی فنگسائڈس کے خلاف مزاحمت

کھائیں۔ چڈینوف ، V.A. پلاٹونوف ، اے وی۔ اسکندروفا ، ایس این ایلانسکی

یہ حال ہی میں دکھایا گیا ہے کہ اسکومیسیٹی فنگس Ilyonectria کریسا آلو کے تندوں کو متاثر کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے۔ یہ کام پہلا ہے جس نے حیاتیاتی خصوصیات اور I. کی کچھ فنگسائڈس کے خلاف مزاحمت کا تجزیہ کیا ہے۔ آلو سے الگ تھلگ کرسٹا تناؤ۔ "آلو" کے تناؤ کے پرجاتیوں کے مخصوص خطوں کی ترتیب ڈفودیل ، جنسنگ ، اسپن اور بیچ ، للی بلب اور ٹیولپ پتیوں کی جڑوں سے الگ تھلگ کوکیی کے لئے پہلے حاصل کی گئی تھی۔ بظاہر ، جنگلی اور باغیچے کے بہت سے پودے I. کریسا کے ذخائر ہوسکتے ہیں۔ تفتیش میں ٹماٹر اور آلو کے ٹکڑوں کو متاثر کیا گیا ، لیکن اس نے پورے ٹماٹر کے پھلوں یا برقرار آلو کے ٹبر کو متاثر نہیں کیا۔ اس سے ظاہر ہوتا ہے کہ I. کرسہ ایک زخم کا پرجیوی ہے۔ کسی غذائی اجزاء پر فولڈو آکسونیل ، ڈفائنوناکازول اور ایزوکسسٹروبن کے خلاف مزاحمت کی تشخیص نے ان دوائیوں کی اعلی افادیت کو ظاہر کیا۔

ای سی 50 اشارے (فنگسائڈ سے حراستی ، جو فنگسائڈ فری کنٹرول کے مقابلے میں کالونی کی شعاعی نشوونما کی شرح سے 2 گنا کم ہوجاتی ہے) 0.4 کے برابر تھا۔ بالترتیب 7.4 اور 4 ملی گرام / ایل۔ جب آلو کے تندوں کی فائیٹوپیتھولوجیکل تشخیص اور پودوں کے تحفظ کے اقدامات کی نشوونما میں I. کریسا کی وجہ سے ہونے والی بیماری کی ترقی کے امکان کو دھیان میں رکھنا چاہئے۔

فائیٹوپیتوجینک مائکروجنزموں کی نشوونما آلو کو بڑھنے اور ذخیرہ کرنے کے تمام مراحل میں زیادہ نقصان کا باعث بنتی ہے۔ جب حفاظتی اقدامات کی منصوبہ بندی کرتے ہو تو ، ایک قاعدہ کے طور پر ، معروف پیتھوجینز کو دھیان میں لیا جاتا ہے ، جیسے جینیرا الٹیناریا ، فوساریئم ، فوما ، ہیلمنتھوسپوریم ، کولیٹوٹریچم ، فائپوٹھورا ، وغیرہ کی ذاتیں تاہم ، حالیہ برسوں میں ، آلووں پر نئے فائیٹوپیتھوجک مائکروجنزموں کی ظاہری شکل کے بارے میں زیادہ سے زیادہ اطلاعات سامنے آئیں۔ ان کی حیاتیات کا غیر تسلی بخش مطالعہ کیا جاتا ہے ، آلو پر ان کے سلسلے میں استعمال ہونے والی فنگسائڈس کی تاثیر معلوم نہیں ہے ، تشخیصی طریقے تیار نہیں ہوئے ہیں۔ بڑے پیمانے پر ترقی کے ساتھ ، وہ آلو کی فصل کو نمایاں نقصان پہنچانے کے اہل ہیں۔ ان مائکروجنزموں میں سے ایک ascomycete fungus Ilyonectria crassa (Wollenw.) A. Cabral & Crous ہے ، جو پہلے آلو کے تندوں (مصنف ایٹ ال. ، 2019) پر مصنفین نے دریافت کیا تھا۔

یہ کام آلو کے تندوں سے الگ تھلگ I. کریسا تناؤ کے تجزیہ کے نتائج پیش کرتا ہے۔ کالونیوں اور آئی کراسا کے متعدد ڈھانچے کی شکل ، پرجاتیوں سے مخصوص ڈی این اے والے خطوں کے نیوکلیوٹائڈ تسلسل ، آلو اور ٹماٹر کی وائرلیس اور کچھ مشہور فنگسائڈس کے خلاف مزاحمت کا مطالعہ کیا گیا۔

مواد اور طریقے

ہم نے کرسٹا 18KSuPT2 تناؤ کو کوسٹرما کے علاقے میں اگنے والے متاثرہ آلو کے نل سے 2018 میں الگ تھلگ استعمال کیا۔ ٹائبر ہلکی بھوری میسیلیم کے ساتھ ڈھکی ہوئی گہا کے ساتھ خشک سڑ کی قسم سے متاثر ہوا تھا۔ جراثیم سے جدا کرنے والی انجکشن کا استعمال کرتے ہوئے ، فنگل مائسیلیم کو آگر میڈیم (بیئر ورٹ 10٪ ، اگر 1.5٪ ، پینسلن 1000 یو / ملی) کے ساتھ پیٹری ڈش میں منتقل کردیا گیا تھا۔ پلیٹیں اندھیرے میں 24 ڈگری سینٹی گریڈ پر سینک جاتی تھیں۔

آئی سی سی 2500 ایچ ڈی ڈیجیٹل کیمرا کے ساتھ ایک لائیکا ڈی ایم 50 لائٹ مائکروسکوپ اور ایک آئی سی 80 ایچ ڈی ڈیجیٹل کیمرہ (لائیکا مائکرو نظام ، جرمنی) کے ساتھ لییکا ایم 80 بائنوکلر مائکروسکوپ کا استعمال فوٹوگرافر ، نیزجوں اور بیضوی اعضاء کی شکل اور شکل کی تشخیص کے لئے کیا گیا تھا۔

ڈی این اے کو الگ تھلگ کرنے کے لئے ، فنگل مائسییلیم مائع مٹر میڈیم میں اگائی گئی تھی ، پھر مائع نائٹروجن میں منجمد ، ہوموجنائزڈ ، سی ٹی اے بی بفر میں انکیوبیٹڈ ، کلورفارم سے پاک ، اور 2 فیصد الکحل کے ساتھ دو بار دھویا گیا تھا۔

ڈی ٹی اے نکالنے کے طریقہ کار کوٹوزوفا ایٹ ال کے مضمون میں تفصیل سے بیان کیا گیا ہے۔ (2017)

آناخت طریقوں سے پرجاتیوں کا تعی andن کرنے اور دوسرے معروف I. کریسا تناؤ کے ساتھ موازنہ کرنے کے لئے ، پی سی آر پرائمر کے ساتھ انجام دیا گیا جس نے پرجاتیوں کے مخصوص DNA علاقوں کو بڑھاوا دیا: ITS1-5,8،2S-ITS5 (پرائمر ITS4 / ITS1990، وائٹ ایٹ ال، 2)، جین ریجنز بی -ٹبلن (بی ٹی 2 اے / بی ٹی 1995 بی ، گلاس ، ڈونلڈسن ، 1) اور ترجمہ بڑھاوا عنصر 1α (tef1α) (پرائمر EF728-1F / EF986-1999R ، کاربون اور کوہن ، 3.1)۔ مطلوبہ لمبائی کے امپلیکس جیل سے ایروجن کلین اپ کٹ کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا۔ بڑھائے گئے علاقوں کو اپلائیڈ بایو سسٹم 3730 xl آٹومیٹڈ سیکوینسر (اپلائیڈ بایو سسٹم ، CA ، USA) پر بگ ڈائی ٹرمنیٹر v6 سائیکل سیکینس کٹ (اپلائیڈ بایو سسٹم ، CA ، USA) کا استعمال کرتے ہوئے ترتیب دیا گیا۔ امریکی نیشنل سینٹر برائے بائیوٹیکنالوجی انفارمیشن (NCBI) GenBank ڈیٹا بیس میں میچ کی تلاش کے ل to نتیجے میں نیوکلیوٹائڈ تسلسل کا استعمال کیا گیا۔ Phylogenetic تجزیہ میگا 2013 پروگرام (تامورا ET رحمہ اللہ تعالی ، XNUMX) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔

بڑے پھل والے ٹماٹر (مختلف قسم کے ڈبراوا) اور آلو کے تند (مختلف قسم کے گالا) کے پورے سبز پھلوں پر وائرلیس کا تعین کیا گیا تھا۔ اس کے علاوہ ، نقصان شدہ پھلوں اور تندوں کو پہنچنے والے نقصان کی تخمینہ لانے کے ل we ، ہم نے ایک ہی پھلوں اور تندوں کے ٹکڑے استعمال کیے۔ مرطوب چیمبروں میں ٹبروں کے ٹکڑے رکھے گئے تھے ، جو نیچے گیلے فلٹر پیپر کے ساتھ پیٹری ڈش تھے۔ کاغذ پر ایک سلائڈ رکھی گئی تھی ، جس کے نتیجے میں ، تندوں یا پھلوں کے ٹکڑے رکھے جاتے تھے۔ پورے تندور اور پھل بھی نچلے حصے میں گیلے فلٹر پیپر والے کنٹینر میں رکھے گئے تھے۔ سلائس کے وسط میں (یا ٹبر یا پھلوں کی برقرار سطح پر) ، اگرٹ کا ایک ٹکڑا (5 × 5 ملی میٹر) فنگل ہائفے کے ساتھ رکھ دیا گیا تھا ، جو ورٹ ایگر پر اگنے کے 5 دن بعد تھا۔

کوکیی بیماریوں سے لے جانے والے کوکیوں کے تکلیفوں کے خلاف مزاحمت کا جائزہ لیبارٹری کے حالات میں اگر غذائی اجزاء کے ذریعہ کیا گیا تھا۔ ہم نے فنگسائڈیل ادویات میکسم ، کے ایس (ایکٹو جزو فلڈیو آکسونیل ، 25 جی / ایل) ، کواڈریس ، کے ایس (ازوکسائٹروبن 250 جی / ایل) ، اسکور ، ای سی (ڈائیفونکونازول 250 جی / ایل) (ریاستی کیٹلاگ ... ، 2020) کے حساسیت کا مطالعہ کیا۔ پیٹری ڈشوں میں وارٹ ایگر میڈیم پر تشخیص کیا گیا تھا جو فعال مادہ 0.1 کے حراستی میں مطالعہ شدہ دوائیوں کے اضافے کے ساتھ تھا۔ ایک؛ 1 پی پی ایم (مگرا / ایل) (فلڈیو آکسونیل اور ڈائفونکونازاز کے لئے) ، 10؛ دس؛ 1 پی پی ایم (اجوکسائسٹروبن کے لئے) اور بغیر کسی فنگسائڈ (کنٹرول) کے میڈیا میں۔ فنگسائڈ کو پگھل کر 10 ° C میڈیم میں ٹھنڈا کردیا گیا ، جس کے بعد میڈیم کو پیٹری ڈشوں میں ڈالا گیا۔ فنگل مائسیلیم کے ساتھ ایک ایگر بلاک پیٹری ڈش کے بیچ میں رکھا گیا تھا اور اندھیرے میں 100 ڈگری سینٹی گریڈ کے درجہ حرارت پر مہذب تھا۔ انکیوبیشن کے 60 دن کے بعد ، کالونیوں کے قطر وسیع پیمانے پر دو لمبائی میں ناپے گئے۔ ہر کالونی کے لئے پیمائش کے نتائج اوسط کیے گئے تھے۔ تجربات سہ رخی میں کئے گئے تھے۔ تجزیوں کے نتائج کی بنیاد پر ، EC24 کا تخمینہ کیا گیا تھا ، فنگس مار کے ارتکاز کے برابر تھا ، جس نے فنگسائڈل کنٹرول کے مقابلہ میں کالونی کی شعاعی نشوونما کی شرح کو آدھا کردیا تھا۔

نتائج اور مباحثہ

وارٹ ایگر کے ساتھ پیٹری پکوانوں پر ، فنگس نے سفید فلاکولیٹ میسیلیم کے ساتھ کالونییاں تشکیل دیں۔ میسیلیم کے نیچے کا وسط سرخ رنگ کا ہو گیا۔ جب میڈیم سوکھ جاتا ہے تو ، فنگس نے چھوٹے اسپوڈوچیا میں سنگل اور مجموعی کونڈیفوروس پر دو قسم کے بیضوں کی تشکیل کی تھی۔ میکروکونیڈیا لمبے لمبے ، سلنڈرک ، ایک سے تین سیٹا کے ساتھ ، اوسط لمبائی 27.2 µm کی قیمتوں کی حدود کے ساتھ 23.2 سے 32.2 µm ، چوڑائی - 4.9 µm تک (تصویر 1) ہے۔ مائکروکونڈیا کی اوسط لمبائی 14.3 سے 10.3 µm تک اقدار کی ایک حد کے ساتھ 18.1 .4.0m ہے ، چوڑائی 2012 XNUMXm تک ہے۔ تمام میکرو- اور مائکروومورفولوجیکل کردار Ilyonectria کریسا (Cabral ET رحمہ اللہ تعالی. ، XNUMX) پرجاتیوں کی مختلف رینج میں فٹ بیٹھتے ہیں۔

پرجاتیوں کے لحاظ سے مخصوص ڈی این اے علاقوں (ITS، b-tubulin، TEF 1 of) کے سلسلے مکمل طور پر I. کریسا تناؤ کے تسلسل کے ساتھ موافق ہیں جن کا ہم نے پہلے مطالعہ کیا تھا (Chudinova et al.، 2019، ٹیبل 1)۔ دوسرے علاقوں میں I. کرسہ کے پھیلاؤ کا مطالعہ کرنے اور متاثرہ ثقافتوں کے اسپیکٹرم کا تجزیہ کرنے کے ل Gen ، جنبینک ڈیٹا بیس میں اسی طرح کے ڈی این اے سلسلے کا تجزیہ کیا گیا (ٹیبل 1)۔ اوورلیپ 86 سے 100٪ تھی۔ "آلو" I. کرسٹا تناؤ کے تینوں ڈی این اے خطوں کی ترتیب نیدرلینڈ میں للی بلب اور نرسسس جڑوں سے اور کینیڈا میں جنسنینگ جڑ سے الگ تھلگ تناؤ کے سلسلے کی طرح ہے۔ ہم کھلے ڈیٹا بیس میں تجزیہ کردہ اسی طرح کے تین نقشوں کے ساتھ I. کریسا تناؤ کو تلاش کرنے میں ناکام رہے۔ تاہم ، جمع شدہ آئی ٹی ایس اور بی ٹبلن تسلسل کے تجزیے سے برطانیہ میں ٹیولپ پتیوں پر I. کریسا کی موجودگی ظاہر ہوئی۔ اسی طرح کے آئی ٹی ایس ترتیب کے ساتھ پھنسے کینیڈا میں ایسپین جڑوں کی مائکوبیٹا اور اٹلی میں ساحل کی جڑیں ، سعودی عرب میں آلو کے تندوں (ٹیبل 1) کے تجزیہ میں شناخت ہوئے تھے۔ اس تحقیق کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ I. کریسا کی عالمی سطح پر تقسیم ہے اور پودوں کی مختلف اقسام کو متاثر کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے۔

5 ویں دن ٹماٹر اور آلو کے ٹکڑوں پر روگزنقیت کا تعین کرتے وقت ، گھاو کا قطر 1.5 سینٹی میٹر تک پہنچ گیا ۔تفتیش شدہ تناؤ نے پورے ٹماٹر کے پھلوں اور برقرار آلو کے تند کو متاثر نہیں کیا۔ تاہم ، ٹماٹر پر سگنل متاثر ہوئے۔ آلودگی کے امکان کو خارج کرنے کے لئے ، آلو کے ٹبر سلائس پر تیار کردہ میسیلیم سے کوکیی تنہائی کو ایک خالص ثقافت میں الگ کردیا گیا تھا۔ یہ والدین کے تناؤ کی طرح یکساں تھا۔ بظاہر ، I. کرسا ایک زخم کا پرجیوی ہے۔

فنگسائڈس کے ساتھ بیج کے تندوں کا پہلے سے پودے لگانے کا علاج بڑھتے ہوئے موسم میں پودوں پر بیماریوں کی نشوونما کو کم کرتا ہے۔ مؤثر فنگسائڈس کے انتخاب کے ل assess ، اس بات کا اندازہ کرنا ضروری ہے کہ ان میں سے کون سی I کے خلاف موثر ہے۔ کام نے فنگائی ادویات کے بڑے پیمانے پر فعال مادہ کا مطالعہ کیا - فلڈیو آکسونیل ، ایزوکسائٹروبن ، ڈفائینکونازول۔ فلڈیو آکسونیل پودے لگانے سے پہلے بیجوں اور بیج کے تندوں کو ڈریسنگ کے لئے استعمال ہونے والے متعدد مرکب میں شامل ہے۔ فولڈو آکسونیل (میکسم) اسٹوریج سے پہلے بیج کے تندوں کے علاج کے لئے بھی استعمال ہوتا ہے۔ بیجوں کے مواد کی پروسیسنگ کے لئے استعمال ہونے والی متعدد تیاریوں کے ساتھ ساتھ نباتاتی پودوں کی پروسیسنگ کے لئے تیار کردہ تیاریوں میں (اسٹیٹ کیٹلوگ ... ، 2020) بھی شامل ہیں۔

I. کریسا کی شرح نمو کا جائزہ میڈیا (تصویر 2) پر فعال مادوں کی مختلف حراستی کے ساتھ کیا گیا: فلڈیو آکسونیل (EC50 = 0.4 پی پی ایم) ، Azoxystrobin (EC50 = 4 پیپییم) ، اور ڈائیفنوکنازول (EC50 = 7.4 پی پی ایم) (ٹیبل 2)۔ ان تیاریوں کو I. کریسا کے خلاف انتہائی موثر سمجھا جاسکتا ہے ، کیونکہ ان کی EC50 تندوں کے علاج کے ل used استعمال ہونے والے سیال میں تیاری کی تجویز کردہ حراستی سے نمایاں طور پر کم ہے۔ اسٹیٹ کیٹلوگ ... (2020) کے مطابق ، آلو کے تندوں کے علاج کے ل the مائع میں فولڈو آکسونیل کی حراستی 500 سے 1000 پی پی ایم تک ہے ، ازوکسائسٹروبن (تاروں کے نیچے کے علاج کے ل the مائع میں) - 3750-9375 پی پی ایم ، ڈیوفونکونازول (پودوں والے پودوں کے علاج کے ل the مائع میں) - 187.5– 625 پی پی ایم۔

جدول 1. جنبینک ڈیٹا بیس میں دستہ 18KSuPT2 اور Ilyonectria کرسہ کے تناؤ کے پرجاتیوں کے مخصوص سلسلوں کی ترتیب مماثلت

این ڈی = جمع نہیں ہے

جدول 2. آلیونیکٹیریا کریسا کی فنگسائڈس سے مزاحمت

ہمارے کام میں ، I. کریسا تناؤ کوسٹرووما اور ماسکو (Chudinova et al. ، 2019) علاقوں میں آلو کے تندوں سے الگ تھلگ کیا گیا تھا۔ I. سے ملتے جلتے ITS کی تسلسل کے ساتھ فنگل تناؤ کا ایک اعلی تناسب سعودی عرب (گشگری اور Gherbawy ، 2013) میں آلو کے tubers کے mycobiota کا تجزیہ کرتے وقت انکشاف ہوا۔ بظاہر ، I. کریسا آلو پر اتنا کم نہیں ہے جتنا اسے لگتا ہے۔ ہمارے تجربات سے پتہ چلتا ہے کہ فنگس ٹماٹر کے پھلوں کو نقصان پہنچا سکتا ہے۔ اس لٹریچر سے معلوم ہوا ہے کہ I. کرسا مٹی میں sapotrophically (مول ET رحمہ اللہ تعالی ، 2016) میں ترقی کرنے کے ساتھ ساتھ متعدد پودوں کو بھی متاثر کرتی ہے ، یہاں تک کہ مالی لحاظ سے دور دراز جیسے ڈیفڈلز ، للی ، جنسنگ ، ایسپین اور بیچ (ٹیبل 1)۔ ایک)۔ بظاہر ، جنگلی اور باغیچے کے بہت سے پودے I. کریسا کے ذخائر ہوسکتے ہیں۔ مندرجہ بالا سے پتہ چلتا ہے کہ جب حفاظتی اقدامات تیار کرتے ہیں تو ، اس کوکی سے آلو کے تندوں کو متاثر ہونے کے امکان کو بھی مدنظر رکھنا ضروری ہے۔ فلڈو آکسوونیل ، ازوکسائٹروبن اور ڈفائونوکونازول پر مشتمل آلو کے تندوں کے علاج کے لئے وسیع پیمانے پر تیاریوں میں I. کریسا کے خلاف اعلی فنگسائڈیل افادیت ظاہر کی گئی ہے۔

اس کام کو روسی فاؤنڈیشن برائے بنیادی تحقیق (گرانٹ نمبر 20-016-00139) نے تعاون کیا۔

مضمون 2020 ، 103 (3) جریدے "پلانٹ پروٹیکشن بلیٹن" میں شائع ہوا تھا۔