ڈی یو رائزنتسیف ، ای۔ ایم چودینوفا ، ایل یو کوکایو ، ایس این ایلانسکی ، پی این بالابکو ، جی ایل بیلوا ، ایس کے زاوریف
فائیٹوپیتوجینک فنگس کولیٹوٹریچم کوکوڈس آلو اور ٹماٹر میں خطرناک بیماریوں کا سبب بنتے ہیں جو انتھریکنوز اور ٹائبر بلیک سپاٹ کے نام سے جانا جاتا ہے۔ اخلاقی خصوصیات کے ذریعہ ، انہیں اکثر دوسرے سوکشمجیووں کی وجہ سے ہونے والی بیماریوں سے ممتاز کرنا مشکل ہوتا ہے۔ سبز رنگ کے ٹماٹر پھلوں پر ، یہ مرض لاپرواہ ہوسکتا ہے ، جو خود صرف پکے ہوئے سرخ پھلوں پر ہی ظاہر ہوتا ہے۔ اس پیتھوجین کی فوری اور درست تشخیص کے لئے ، ریئل ٹائم پی سی آر ٹیسٹ سسٹم پیش کیا جاتا ہے۔ ایک ٹیسٹ سسٹم تیار کرنے کے لئے ، روس کے مختلف علاقوں میں آلو کے تاروں سے الگ تھلگ 45 ڈگری گیسرول ٹرائفوسفیٹ ڈیہائیڈروجنیس جین کا نیوکلیوٹائڈ تسلسل طے کیا گیا تھا۔
جنبینک ڈیٹا بیس میں دستیاب دیگر پرجاتیوں کے ملتے جلتے تسلسل کے نتائج اور تجزیے کی بنیاد پر ، پرجاتیوں کے لئے مخصوص پرائمر اور سی کوکوڈ کے لئے تحقیقات تیار کی گئیں۔ تخلیق شدہ ٹیسٹ سسٹم کی خصوصیات کو جانچنے کے لئے ، پی سی آر کو ٹماٹر اور آلو کے پودوں سے وابستہ مختلف مختلف پرجاتی اور سایپرٹوفک کوک کی خالص ثقافتوں سے الگ تھلگ ڈی این اے کے ساتھ کیا گیا تھا (فوسیرئم آکسیسپورم ، ایف. ورٹیسیلیم ، فومپسس فیلوولی ، الٹینیریا الٹرنیٹا ، ہیلینتھسپوریئم سولانیکوسٹس ، فیلینس فرگوائنوالوٹینس ، اسٹیمفیلیم ویسیکاریئم ، ہیلمنتھوسپوریم سولانی ، فومپوسس فیزولی ، نیونیکٹیریا ریڈیکولا ، رائزوکٹونیا سولانی ، پینسلیلیم سپ. کولیٹوٹریچم کوکوڈز ڈی این اے کی موجودگی کا تعین 15–20 کے ایک دہلیز سائیکل پر کیا گیا تھا ، جب کہ 27 دوسری سائیکلوں کے بعد دوسری پرجاتیوں کا پتہ چلا یا ان کا پتہ نہیں چل سکا۔ ٹیسٹ سسٹم نے تجزیہ کردہ پی سی آر مرکب میں سی کوکوڈز ڈی این اے حراستی 40 این جی / ملی میٹر سے زیادہ قابل اعتماد طریقے سے پتہ لگانا ممکن بنادیا ہے۔ ترقی یافتہ ٹیسٹ سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے ، ٹماٹر کے پتے میں سی کوکوڈز کی موجودگی کی وجہ سے کوکیی بیماریوں کی علامات اور آلو کے نلوں میں بیماری کی بیرونی علامات کے بغیر تحقیقات کی گئیں۔ کوسٹروما ، ماسکو ، کالوگا ، نزنی نوگوروڈ علاقوں کے کھیتوں سے - کرسنوڈار خطے کے دو مختلف شعبوں ، تندوں سے کوکیی انفیکشن کی علامات والی پتیوں کو جمع کیا گیا تھا۔ کرسنوڈار علاقہ میں ایک ٹماٹر کا پتی جس میں سی کوکوڈس ڈی این اے تھا پایا گیا تھا۔ کوسٹرووما ، ماسکو ، کالوگا علاقوں میں اگنے والے تندوں کے 0.01 نمونے میں اس روگزن کے ڈی این اے کی نمایاں موجودگی کا پتہ چلا۔
تعارف
جیلیس کولیٹوٹریچم کی فنگی خطرناک فوٹوپیتوجن ہیں جو اناج ، سبزیاں ، جڑی بوٹیاں ، بارہماسی پھل اور بیری کے پودوں کو متاثر کرتی ہیں۔ اس جینس کی ہر قسم کی ایک ذات ، کولیٹوٹریچم کوکوڈس (والر) ہے۔
ہیوز ، انتھکرنوز اور آلو اور ٹماٹر کی کالی جگہ کا کارآمد ایجنٹ ہے ، اور اس سے سولاناسی خاندان کے متعدد دوسرے پودوں کی بیماریوں کا سبب بنتا ہے۔ ماتمی لباس (دلارڈ ، 1992)۔ سی کوکوڈ پودوں کے تمام زیر زمین حصوں ، تنے اڈوں ، پتیوں اور پھلوں کو متاثر کرتے ہیں (اینڈریوین ایٹ ال۔ 1998 ، جانسن ، 1994)۔ متاثرہ آلو کے تاروں کے چھلکے پر ، واضح طور پر واضح کناروں کے ساتھ بھوری رنگ کے دھبوں کی نشوونما دیکھنے میں آتی ہے ، جس پر سپورلیشن اور مائکروسکلروٹیا کے سیاہ نقطے واضح طور پر دکھائی دیتے ہیں۔ اسٹوریج کے دوران ، نرم ہونے والے اجزاء کے ساتھ السر ٹائبرز کے گودا میں بن سکتے ہیں ، یعنی۔ یہ مرض انتھریکنوز مرحلے میں داخل ہوتا ہے ، تاہم ، یہ بہت کم ہوتا ہے۔
ایک ہی وقت میں ، انتھکرنوز کی علامات (چھوٹے سیاہ نقطوں کے ساتھ جلد کے السر) ٹماٹر کے پھلوں پر عام ہیں۔ پتیوں پر ، سی کوکوڈس کی علامت گہری بھوری رنگ کے دھبوں کی طرح نمودار ہوتی ہے ، عام طور پر پیلا ٹشو سے جڑی ہوتی ہے (جانسن ، 1994)۔
تندوں پر کالے داغ کی نشوونما ان کی ظاہری شکل کو خراب کردیتی ہے ، جو خاص طور پر اس بات کا تلفظ کیا جاتا ہے جب دھوئے ہوئے سرخ آلو والے آلو فروخت کرتے ہو۔ چھلکا پھیلنے سے بخارات زیادہ ہوجاتے ہیں اور اسٹوریج میں اضافہ ہوتا ہے (بھوک ، میکانٹیئر ، 1979) پودوں کے دوسرے اعضاء کو پہنچنے والے نقصان سے پیداوار کا نقصان ہوتا ہے ، جس کی کھلی اور بند گراونڈ دونوں میں نوٹ کیا گیا تھا (جانسن ، 1994؛ ٹرسر ایٹ ال۔ ، 1999)۔ سی کوکوڈ کی وجہ سے ہونے والی بیماریاں روس سمیت دنیا کے تقریبا all آلو پیدا کرنے والے تمام خطوں میں عام ہیں۔ (لیزا ، ہلٹن ، 2003 Bel بیلیوٹ ایٹ ، 2018)۔ سی کوکوڈز کے خلاف موجودہ فنگسائڈس کی ناکافی تاثیر اور مزاحم قسموں کی کمی (پڑھیں ، چھپائیں ، 1995) کی وجہ سے ان بیماریوں پر قابو پانا مشکل ہے۔
سی کوکوڈس انوکولم بیج کے تندوں (پڑھیں ، چھپائیں ، 1988 Joh جانسن ایٹ ال. ، 1997) ، ٹماٹر کے بیج (بین ڈینیئل ایٹ ال ، 2010) ، پودے کے ملبے پر ، مٹی میں طویل عرصے تک زندہ رہ سکتے ہیں (دلارڈ ، 1990 ؛ دلارڈ ، کوب ، 1993) اور ماتمی لباس میں (رائڈ ، پینیپیکر ، 1987)۔ متعدد مصنفین کے کام (پڑھیں ، چھپائیں ، 1988 ark بارک ڈول ، ڈیوس ، 1992 Joh جانسن ایٹ ال۔ 1997 مٹی لہذا ، بیماری سے ہونے والے نقصانات کو کم کرنے کے ل the ، بیج کے مواد میں ، مٹی میں ، بیج آلو کے تندوں اور ٹماٹر کے بیجوں میں ذخیرہ کرنے کے لئے رکھے ہوئے ، فنگس کے پھیلاؤ کی تشخیص کرنا ضروری ہے (مقدار سمیت) مٹی اور پودوں کے مادے میں مورفولوجیکل تشخیص صرف مائکروسکلروٹیا کی موجودگی سے ہی کیا جاسکتا ہے ، تاہم ، یہ دوسری قسم کی کوکیوں میں بھی پایا جاتا ہے۔
تندوں کی علامات چاندی کے کھرد سے بہت ملتی ہیں جیسے فنگس ہیلمینتھسپوریم سولیانی کی وجہ سے ہوتی ہیں۔ خالص ثقافت میں کولیٹروٹرم کوکوڈز اور ہیلمینتسپوریم سولانی کا تنہا ہونا مشکل ہے اور کسی غذائی اجزاء کے ذریعہ آہستہ آہستہ اضافے کی وجہ سے اس میں کافی وقت لگتا ہے۔ کولیٹوٹریچم کوکوڈ کو جلدی سے شناخت کرنے کے ل instrument ، آلہ تشخیصی طریقے استعمال کرنا ضروری ہے۔ سب سے زیادہ آسان طریقہ پولیمریز چین رد عمل (پی سی آر) اور اس میں ترمیم ہے - اصل وقت کا پی سی آر۔ فی الحال ، آر ڈی این اے کے آئی ٹی ایس 2002 خطے کے لئے برطانوی محققین (کولن ایٹ ال۔ ، 1) کے ذریعہ تیار کردہ ایک ٹیسٹ سسٹم کا استعمال یورپ اور ریاستہائے متحدہ میں کیا جاتا ہے۔ اس کے استعمال سے روسی الگ تھلگوں (Belov et al، 2018) کے تجزیہ میں اچھے نتائج سامنے آئے ہیں۔ تاہم ، سی کوکوڈز انتہائی متغیر ہیں اور کسی ڈی این اے ترتیب سے اس کا پتہ لگانے سے غلط منفی نتائج برآمد ہوسکتے ہیں۔ زیادہ معتبر تشخیص کے ل analysis ، متعدد پرجاتیوں سے متعلق ڈی این اے کی ترتیب کے لئے تجزیہ کرنا ضروری ہے ، اور اسی وجہ سے ہم نے ایک اصل ٹیسٹ سسٹم تیار کیا ہے جو گلیسرایلڈہائڈ -3-فاسفیٹ ڈیہائیڈروجنیس جین کے تسلسل سے سی کوکوڈس کی شناخت کرنے کی اجازت دیتا ہے۔
مواد اور طریقے
تخلیق شدہ ٹیسٹ سسٹم کی تاثیر اور خصوصیت کا اندازہ لگانے کے لئے ، ہم نے مصنفین کو ٹماٹر کے پتے اور پھلوں ، آلو کے تندوں (ٹیبل 15) کے بیمار نمونوں سے مصنفین کے ذریعہ الگ تھلگ کوکیی کی 1 پرجاتیوں کی خالص ثقافتیں استعمال کیں۔ تنہائی کے ل we ، ہم نے پودوں کے اعضاء کو لے لیا جس میں فنگل انفیکشن کی علامات ہیں ، فی بش میں ایک اعضاء سے زیادہ نہیں۔
چھلکے کے ساتھ ٹبر کا ایک ٹکڑا ، ٹماٹر کے پھلوں کا ایک ٹکڑا ، اور ایک متاثرہ پتی دوربین مائکروسکوپ کے نیچے رکھ دیا گیا تھا ، جس کے بعد مائیسیلئم ، سپورز ، یا ٹشو کا ایک ٹکڑا پیٹری ڈش میں تیز تیز تر کرنے والی انجکشن کے ساتھ ایگر میڈیم (وارٹ ایگر) میں منتقل کردیا گیا تھا۔ الگ تھلگ ٹیسٹ ایبل میں آگر سلیٹ پر 4 ° سینٹی گریڈ پر محفوظ تھے۔
کوکیی بیماریوں کی علامات کے ساتھ ٹماٹر کے پتے کے نمونے ، تجزیہ کے ارادے سے ، جمع کرنے کے فورا. بعد (کھیت میں) 70 eth ایتھل الکحل میں رکھے گئے تھے جس میں وہ ڈی این اے تنہائی تک محفوظ رکھے گئے تھے۔ آلو کے نلوں کو لیبارٹری میں پہنچایا گیا ، ان سے چھلکا (2 × 1 سینٹی میٹر کا ٹکڑا) بنا کر –20 ° at پر منجمد کردیا گیا۔ ڈی این اے تنہائی تک منجمد ذخیرہ۔
ڈی این اے تنہائی کے لئے کوکیوں کی خالص ثقافتیں مائع مٹر میڈیم میں اگائی گئیں۔ فنگس کے مائسیلیم کو مائع میڈیم سے ہٹا دیا گیا ، فلٹر پیپر پر خشک ، مائع نائٹروجن میں منجمد ، ہوموجنائزڈ ، سی ٹی اے بی بفر میں انکیوبیٹڈ ، کلوروفارم سے پاک ، آئسوپروپنول اور 0.5 ایم پوٹاشیم ایسیٹیٹ کے مرکب کے ساتھ تیز ہوا ، اور 2 alcohol الکحل کے ساتھ دو بار دھویا گیا۔ نتیجے میں ڈی این اے کو ڈیونائزڈ پانی میں تحلیل کردیا گیا اور اسے –70 ° stored (کوتوزوفا ایٹ ال۔ ، 20) میں محفوظ کیا گیا۔ ڈی این اے حراستی کیوبٹ 2017 (کیجین ، جرمنی) پر ڈبل پھنسے ہوئے ڈی این اے کے لئے ایچ ایس ڈی این اے کوانٹیفیکیشن کٹ کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔ الکحل اور منجمد نمونے مائع نائٹروجن میں ٹریٹوریٹ ہوئے تھے ، اس کے بعد ڈی این اے تنہائی کے بعد مذکورہ بالا (خالص فنگل ثقافتوں کے مائیسیلیم کے ل))
جدول 1. استعمال شدہ فنگل تناؤ کی ابتدا
مشروم کا نام | پودا ، عضو | انتخاب کی جگہ |
---|---|---|
کولیٹوٹریچم کوکوڈ 1 ، سی کوکوڈ 2 ، سی کوکوڈ 3 ، الیونیکٹیریا کریسا ، رائزوکٹونیا سولانی | آلو ٹبر | کوسٹروما خطہ ، پہلی کھیت کی نسل کے آلو کے تند ، کھیتیاری ریڈ سکارلیٹ |
کولیٹوٹریچم کوکوڈ 4 | آلو کی پتی | نمائندہ. ماری ایل ، یوشکر اولا |
ہیلمینتسپوریم سولانی | آلو ٹبر | مگدان علاقہ ، مقام خیمہ ، آلو کا تند |
کلوداسپوریئم فلویم | ٹماٹر کی پتی | ماسکو کا خطہ ، بڑا پھل والا ٹماٹر |
الٹیناریا ٹماٹوفیلہ | ٹماٹر کا پھل | پلانٹ پروٹیکشن کے آل روسی ریسرچ انسٹی ٹیوٹ کی مائکولوجی اور فائٹوپیتھولوجی کی لیبارٹری کے عملے کے ذریعہ |
فوساریئم ورٹیسیلیم ، فومپسسفیسولی ، الٹیناریا الٹرنٹا ، فیلینس فرروگینوویلوٹینس ، اسٹیمفیلیم ویساریئریم ، کلیڈوسپوریم کلاڈوسپوریائڈز ، ایکروڈونٹیم لزولائ ، پینسیلیم ایس پی۔ | ٹماٹر کا پھل | کرسنوڈار علاقہ ، کریمسکی ڈسٹرکٹ ، گریڈ کریم |
Fusarium آکسسیورم | گندم کی جڑ | ماسکو کا علاقہ |
پی سی آر ڈی ٹی پرائم ایمپلیفائر (ڈی این اے-ٹکنالوجی) پر انجام دیا گیا۔ پی سی آر کے ل original ، اصلی پرائمر اور گلیسٹرول ٹرائفوسفیٹ ڈیہائیڈروجنیس جین کے پرجاتیوں سے مخصوص خطے کی تحقیقات کا استعمال کیا گیا تھا: فارورڈ پرائمر کوک 70gdf –TCATGATATCATTTCTCTCACGGCA ، ریورس پرائمر Coc280gdr - TACTTGAGCATGTAGGCCTGGT1۔ پرائمر 213 بی پی کے علاقے کو وسعت دیتے ہیں۔
رد عمل میں کل ڈی این اے (پتیوں اور تندوں کے تجزیے میں) اور 50 این جی (کوکیوں کے خالص ثقافتوں کے ڈی این اے کے تجزیہ میں) 10 این جی لیا گیا۔ رد عمل کا مرکب (35 μl) پیرافن پرت کے ذریعہ دو حصوں میں جدا ہوا تھا: نچلی ایک (20 )l) میں 2 × 10 buffl رد عمل کا بفر (750 ملی میٹر Tris-HCl ، پییچ 8.8 200 4 ملی میٹر (NH2) 4SO25 2 0.1 ملی میٹر MgCl20 0.5 7٪ کے درمیان- 4) ، ہر ڈائیونوسینکلیوٹائڈ ٹرائفوسفیٹ کے 1 ملی میٹر ، ہر پرائمر کے 10 شام ، اور ایک ہائڈروالائزبل فلوروسینٹ تحقیقات کے 1 شام۔ اوپری حصے میں XNUMX × پی سی آر بفر کا XNUMX andl اور تق پولیمریز کا XNUMX U ہوتا ہے۔
پیرافین کے ساتھ مرکب کو علیحدہ کرنے سے ٹیوبیں لمبے وقت تک 5 ° C کے درجہ حرارت پر محفوظ رہ سکتی ہیں اور پی سی آر کو 10 ° C سے اوپر درجہ حرارت پر 80 منٹ گرم کرنے کے بعد گرم آغاز فراہم کرتی ہیں۔ پی سی آر کو مندرجہ ذیل پروگرام کے مطابق انجام دیا گیا: 94.0 ° C - 90 s (1 سائیکل)؛ 94.0 ° C - 30 s؛ 64.0 ° C - 15 s (5 سائیکل)؛ 94.0 ° C - 10 s؛ 64.0 ° C - 15 s (45 سائیکل)؛ 10.0 ° C - اسٹوریج۔
نتائج اور مباحثہ
گلیسٹرول ٹرائفوسفیٹ ڈہائڈروجنیز جین کے سلسلے کا تعین روس کے مختلف علاقوں میں پتیوں ، تنوں ، آلو کے تندوں اور ٹماٹر کے پھلوں (کوتوزوفا ، 45) سے الگ تھلگ 2018 تناؤ میں کیا گیا تھا۔ تمام تناؤ کے مطالعہ کردہ تسلسل کو 2 نیوکلیوٹائڈس میں مختلف گروہوں میں تقسیم کیا گیا تھا۔ KY496634 اور KY496635 نمبروں کے تحت دونوں گروپوں کے نمائندوں کے نیوکلیوٹائڈ تسلسل جنبینک میں جمع ہیں۔
پرائمرز coc70gdf ، coc280gdr اور کوکجیڈیز تحقیقات کو ان کی بنیاد پر ڈیزائن کیا گیا تھا BLAST پروگرام (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) جینک بینک کے ڈیٹا بیس میں دستیاب نسل جیلیوں کی کولیٹروٹریم اور دیگر حیاتیات کی نسلوں کے گلیسٹرول ٹرائفوسفیٹ ڈہائڈروجنیز جین کے تمام سلسلوں پر۔
دیگر حیاتیات کے ڈی این اے خطے پرائمر اور تحقیقات سے انتہائی ہم آہنگ نہیں پائے گئے۔
سی کوکوڈز ڈی این اے ، آنتریکنوز سے متاثرہ آلو کے پتے کے ڈی این اے (2017 میں ماڑی ایل ، مختلف قسم کے سرخ سکارلیٹ میں جمع) کے نمونے اور کالی رنگ کی جگہ سے متاثرہ تندوں کے چھلکے (نمونے کے ذریعے ٹیسٹ کے نظام کی حساسیت کی جانچ کی گئی ، مختلف قسم کے ریڈ سکارلیٹ ، ٹیبل 2)۔ آلودگی اور آلو کے پتوں میں ڈی این اے کی موجودگی کی تصدیق کے ل C. ، سی کوکوڈ سٹرین کو ان سے خالص ثقافتوں میں الگ کردیا گیا تھا۔
ٹیسٹ سسٹم کی حساسیت کے تجزیہ کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ اس کا استعمال نمونہ میں سی کوکوڈز ڈی این اے کی کامیابی کی تشخیص کرنے کے لئے کیا جاسکتا ہے جب پی سی آر مرکب میں اس کا کل مواد 0.05 این جی سے زیادہ ہے۔ یہ پتہ لگانے کے لئے کافی ہے ، کیونکہ ایک اسکلیروٹیا میں اوسطا0.131 0.04 این جی ہوتا ہے ، اور ایک بیجانی میں تقریبا 2002 این جی ڈی این اے ہوتا ہے (کولن ایٹ ال۔ ، 2002)۔ انگریزی گروپ کے ذریعہ تیار کردہ ٹیسٹ سسٹم (کولن ایٹ ال. ، 34) نے اسی طرح کی حساسیت ظاہر کی تھی (دہلیز سائیکل 0.05 میں 37 این جی ڈی این اے اور 0.005 پر XNUMX این جی)۔
قدرتی نمونوں کے تجزیہ سے جو ہر صورت میں سی کوکوڈز پر مشتمل ہے نمونہ (ٹیبل 2) میں اپنی موجودگی کو قابل اعتماد طور پر ظاہر کرنا ممکن بنا۔ قدرتی پودوں کے نمونوں کے تجزیہ کے لئے ڈی این اے تنہائی کا مجوزہ طریقہ بھی قابل عمل تھا۔
ٹیبل 2. ریئل ٹائم پی سی آر کے لئے کولیٹوٹریچم کوکوڈس کی شناخت کے لئے مجوزہ ٹیسٹ سسٹم کی حساسیت کا تعین
نمونہ | نمونہ * ، این جی میں ڈی این اے کی مقدار | دہلیز کا چکر | سی کوکوڈس کا پتہ لگانا |
---|---|---|---|
میسیلیم کولیٹروچم کوکوڈ | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
ٹبر کا چھلکا 1 | 50 | 32 | + |
ٹبر کا چھلکا 2 | 50 | 30 | + |
ٹبر کا چھلکا 3 | 50 | 31.5 | + |
آلو کی پتی | 50 | 29.5 | + |
نوٹ. * پی سی آر مصنوعات کے مرکب میں۔
ٹیسٹ کے نظام کی خصوصیات کو کوکیوں کی 15 پرجاتیوں سے نکالے گئے ڈی این اے نمونوں پر جانچا گیا تھا۔ مصنفین نے متاثرہ اور صحتمند پھلوں اور ٹماٹر کے پتے ، آلو کے تندوں سے کوک کے تمام تناؤ کو الگ تھلگ کردیا تھا۔ ایک گندم کو گندم کی جڑ سے الگ کردیا گیا تھا (ٹیبل 1) پھلوں کی سطح سے الگ تھلگ ہونے والی انواع میں ، ایسی ذاتیں بھی موجود ہیں جو ٹماٹر کے لئے روگجنک نہیں ہیں (مثال کے طور پر ، فیلینوس فیروگینویلوٹینوس)۔
مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ سی کوکوڈس ڈی این اے کا پتہ 20-27 کے دہائی کے چکر پر پایا گیا تھا ، جبکہ دیگر فنگل پرجاتیوں کا پتہ نہیں چل پایا تھا یا سائیکل 40 کے بعد اس کو اشارہ دیا گیا تھا ، جس کو منسوب آواز کے اثر (ٹیبل 3) سے منسوب کیا جاسکتا ہے۔
جدول 3. مختلف قسم کے مشروم کے لئے جانچ کے نظام کی جانچ پڑتال
مشروم کا نام | دہلیز کا چکر |
کولیٹوٹریم کوکوڈ 1 | 20.9 |
سی کوکوڈ 2 | 22.6 |
سی کوکوڈ 3 | 23 |
سی کوکوڈ 4 | 22 |
Fusarium آکسسیورم | > 40 |
ایف ورٹیسیلیم | > 40 |
ریزکوٹونیا سولانی | > 40 |
فومپسس فیزولی | > 40 |
الٹیناریا الٹرنٹا | > 40 |
A. ٹماٹوفلا۔ | > 40 |
ہیلمینتسپوریم سولانی | > 40 |
فیلینس فرگوائنوالوٹینس | > 40 |
اسٹیمفیلیم واسکیریم | > 40 |
Ilyonectria کریسا | > 40 |
Cladosporium کلاڈوسپوریائڈس | > 40 |
ج کلولیم | > 40 |
ایکروڈونٹیم لزولے | > 40 |
پینکیلیم SP. | > 40 |
نوٹ. * تمام نمونوں میں ڈی این اے کی مقدار 10 این جی تھی۔
ٹماٹر کے پتے کے نمونے میں سی کوکوڈس کی نشاندہی کرنے کے لئے تیار شدہ ٹیسٹ سسٹم کا استعمال کیا گیا تھا جس میں علامات کے بغیر نیکروٹروپک پیتھوجینز اور بیج آلو کے تندوں کی علامات موجود ہیں۔ مطالعہ کے ل we ، ہم نے کوسٹرووما ، ماسکو ، کالوگا ، نزنی نوگوروڈ علاقوں میں مختلف قسم کے بیجوں کے کنڈ لیا۔ سی کوکوڈز ڈی این اے کی موجودگی کو نمونوں میں قابل اعتماد سمجھا جاتا تھا ، جس کے تجزیہ میں دہلیز سائیکل 35 سے تجاوز نہیں کرتا تھا۔ اس دہلیز کی قیمت کو 0.05 این جی سی کوکوڈز ڈی این اے (دہلیز سائیکل 33.5 ، ٹیبل 2) کے قابل اعتماد عزم کی بنیاد پر منتخب کیا گیا تھا اور یہ حقیقت بھی۔ 40 سے اوپر کی دہلی سائیکل ، کوکی کی کچھ دوسری نوع کے مخصوص ڈی این اے کی تشخیص ہوئی۔ اس نقطہ نظر کے ساتھ ، سی کوکوڈز ڈی این اے کی نمایاں موجودگی کوسٹروما ، ماسکو ، کالوگا علاقوں اور کرسنوڈار کے علاقے یسک ضلع کے ایک ٹماٹر کے پتے میں (ٹیبلز 5 ، 4) پائے جانے والے ٹبروں کے 5 نمونوں میں پائی گئی۔
ٹیبل 4. آلو کے تندوں پر کولیتوٹریم کوکوڈ کی کھوج *
نمونہ نمبر | آلو کی قسم | بڑھتی ہوئی جگہ | سی کوکوڈس کا پتہ لگانا | دہلیز کا چکر |
---|---|---|---|---|
1 | سرخ سرخ رنگ | کوسٹرووما علاقہ | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | سانٹے | ماسکو کا علاقہ | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | ژوکوسکی ابتدائی | ماسکو کا علاقہ | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | مولی | کالوگا علاقہ | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | غیر حقیقی | کالوگا علاقہ | - | |
15 | گالا | نزنی نوگوروڈ خطہ | - | |
16 | - |
نوٹ. * تمام نمونوں میں ڈی این اے کی مقدار 50 این جی تھی۔
ٹیبل 5. ٹماٹر کے پتے پر کولیتوٹریم کوکوڈ کی کھوج *
نمونہ نمبر | بڑھتی ہوئی جگہ | سی کوکوڈس کا پتہ لگانا | دہلیز کا چکر |
---|---|---|---|
1 | کریسنودر علاقہ ، کریمین ضلع | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | کرسنوڈار علاقہ ، ضلع یسک | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
* تمام نمونوں میں ڈی این اے کی مقدار 50 این جی تھی۔
ہمارے ذریعہ تخلیق کردہ جانچ کا نظام اس سے کمتر نہیں ہے جو برطانوی محققین (کولن ایٹ ال. ، 2002) نے حساسیت اور وضاحتی میں تیار کیا تھا اور پودوں کے نمونوں کے تجزیہ کے لئے موزوں ہے۔ بیج کے تندوں کی تجزیہ کے ل Its اس کی درخواست نے خلیوں میں سی کوکوڈز ڈی این اے کی نشاندہی کی اور بیرونی نشانیوں کے بغیر کسی نقصان کی نشاندہی کی اور پتیوں کے انفیکشن کا کامیابی سے تجزیہ کیا۔
آج تک ، روس میں سی کوکوڈس اففٹی کے لئے آلو کے تندوں کا کوئی تجزیہ نہیں کیا گیا ہے۔ ہمارے پہلے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ روسی فیڈریشن کے مختلف علاقوں میں اگنے والے 16 بیجوں کے ٹِبروں میں سے 5 میں سی کوکوڈ ہوتے ہیں۔ اس سے پتا چلتا ہے کہ روس میں آلو کے تاروں کا کالی داغ ایک عام الو کی بیماری ہے ، اور آلو کی فصل کی مقدار اور معیار کو کم کرنے میں اس کے کردار کو کم نہیں سمجھا جاتا ہے۔
ٹماٹر کے پتے کے تجزیے سے کرسنوڈار ٹیریٹریری ضلع یسک سے ایک پتے میں سی کوکوڈز ڈی این اے کی نمایاں موجودگی کا انکشاف ہوا۔ اس سے قبل ، جب برطانوی ٹیسٹ سسٹم (کولن ایٹ ال۔ ، 2002) کا استعمال کرتے ہوئے جنوبی روس میں ٹماٹر کے کھیتوں کا جائزہ لیا گیا تو ، سی کوکوڈ پر مشتمل پتے ملے تھے ، اور کچھ شعبوں میں سی کوکوڈ سے متاثرہ پتیوں کا ایک اعلی تناسب پایا گیا تھا (بیلوف ایٹ ال 2018)۔ ماسکو ریجن ، کرسونوڈر اور پرائمسکی علاقوں میں ، ہمیں ٹماٹر کے پھل ملے ، جہاں سے ہم سی کوکوڈ کی خالص ثقافتوں کو الگ تھلگ کرنے میں کامیاب ہوگئے۔ یہ ممکن ہے کہ روس میں ٹماٹر پر سی کوکوڈ زیادہ پھیل چکے ہیں جتنا کہ اب مانا جاتا ہے ، اور اس کے نقصان کو بھی کم نہیں سمجھا جاتا ہے۔
اس طرح ، آج تک ، آلو اور ٹماٹر میں سی کوکوڈ کی وسیع پیمانے پر تقسیم کے بارے میں کافی معلومات جمع ہوگئی ہیں۔
آلو اور ٹماٹر کی بیماریوں کی نشوونما میں اس فنگس کے کردار کو بہتر طور پر سمجھنے کے لئے ، روس میں اس کے پھیلاؤ کی نگرانی کرنا ، مٹی اور بیجوں کے انفیکشن کے کردار ، اور ذخیرہ کرنے کے دوران نقصانات میں کالے داغ کے کردار کا مطالعہ کرنا ضروری ہے۔ پی سی آر کی تشخیص کے استعمال سے اس کام کو نمایاں طور پر سہولت مل سکتی ہے ، اور دونوں ٹیسٹ سسٹم کے بیک وقت استعمال سے تجزیہ کی درستگی میں نمایاں اضافہ ہوگا۔
اس کام کو روسی سائنس فاؤنڈیشن کے گرانٹ نمبر 18-76-00009 نے مدد کی۔
یہ مضمون جرنل مائکولوجی اور فیوپیتھولوجی (جلد 54 ، نمبر 1 ، 2020) میں شائع ہوا تھا۔